微生物檢測無菌操作有哪些要求？

?? 微生物實驗室 ??

微生物分析的實驗室需遵循“防污染、防危害、分區域”原則，契合檢驗方法要求及生物安全等級。地面、墻面材料和臺面應便于清潔消毒，潔凈區需配備獨立空氣凈化系統，控制溫濕度、壓力等參數，空氣過濾系統定期維護并記錄。

實驗室內應劃分潔凈區、生物安全控制區及輔助區域（陽性菌實驗室、培養室、培養基制備區等），基因擴增檢測實驗室需分隔試劑配制、核酸提取等專用區域并明確標識。

微生物實驗室需對人員/物品進出嚴格控制，僅限授權人員進入，進入人員還需掌握更衣流程及潔凈度要求，確保不影響實驗室的潔凈環境。

微生物實驗室配置的儀器設備應能滿足微生物檢驗工作的需要，關鍵儀器設備應定期進行檢定校準；高壓蒸汽滅菌器按國家有關規定管理并定期檢驗，陽性高壓蒸汽滅菌器應獨立配備。

?? 環境監測 ??

需要定期對微生物潔凈室（區）及隔離系統進行環境監測，監測項目應包括空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及溫濕度、壓差等物理參數，如果監測結果不滿足區域控制要求，需要進行相應的調整后達到規定要求。

?? 實驗前準備 ??

1、開啟潔凈區空氣凈化系統、超凈工作臺風機和紫外線燈，進行自凈，使環境達到相應潔凈度。

2、根據滅菌程序對實驗物品正確實施滅菌。

3、如需無菌取樣，應采用無菌操作技術在具有無菌條件的特定區域中進行，取樣的任何消毒過程不應影響樣品中微生物的檢出。

4、如使用隔離系統，將樣品和實驗物品等預清潔后放入艙體內，開啟滅菌程序。

?? 實驗過程 ??

1、人和物應按照規定的程序進入潔凈區，控制進入人數并盡量減少人員走動。

2、雙手消毒后戴一次性無菌手套，在超凈工作臺中央無菌區域內進行操作。

3、保持工作臺面整潔，必要物品可暫時放置，其他實驗物品用完后及時移出，保證氣體流通；

4、在酒精燈火焰旁的無菌區操作，動作輕緩，幅度宜小，減少不必要的動作；

5、用消毒劑擦拭直接接觸樣品的包裝表面進行消毒后方可打開包裝；

6、加稀釋液時，不應觸碰樣品瓶（袋）口，進行10倍遞增稀釋時，刻度吸管移至下一級稀釋管的內壁近液面處（勿接觸液面），緩慢放出樣液，更換新的刻度吸管進行吹打混勻（不應過于劇烈），也可置混勻器上混勻；

7、一支吸管只能吸取一種溶液，不應交叉使用；加液時如吸管接觸瓶口、瓶外壁，應立即棄用，更換另一支無菌吸管繼續實驗；

8、稀釋液和培養基溫度不應超過45℃；固體培養基滅菌后只可再融化1次，融化后在45℃～50℃保溫時間不應超過8小時；傾倒培養基時瓶口不應接觸平皿，每皿（直徑90mm）注入的培養基量以15mL～20mL為宜；

9、開啟任何一次性無菌耗材都應在超凈工作臺內完成，避免與任何物品觸碰。

10、每次實驗均應設置陰性對照，陽性菌操作應在生物安全控制區完成，不應與待檢樣品共用操作空間；染菌的吸管、玻片等器材應及時置于盛有消毒劑的消毒桶內消毒，待實驗結束后進行高壓蒸汽滅菌（121℃，30min）處理。

11、實驗結束，將實驗物品帶出潔凈區，對工作臺面和地面進行消毒，自凈后關閉空氣凈化系統。